分析薄层层析的操作步骤
1.点样:
⑴ 样品的溶解:将样品溶于展开剂极性相近、挥发性高的**溶剂。
⑵ 薄层点样:用毛细管(0.5mm以下)或用专业点样器进行点样。
点样的要求:样点位置应在距离底边1-1.5cm处;点样量适当;样点直径小于2-3mm;间隔反复点样;多个样点时,间隔为2cm且处于同一条直线上。
经验做法:可先在PC或TLC点上不同量的样品,并展开、显色后观察分离情况,薄层层析硅胶板,以此确定较-佳样品用量。
2.展开:当样点上的溶剂充分挥干后,将薄层放置在密闭容器中,硬质硅胶板,使适当的展开剂从薄层的一端向另一端进行浸润展开的过程。
要求:密闭容器可选用层析缸、标本缸、标本筒等;展开方式有上行法、下行法之分,展开方向有单向、双向、多次展开等。
注意事项:先悬空饱和、再入液展开;样点不能泡在展开剂中;薄层浸入时不能歪斜进入。
硅胶板的主要特点有以下四点:
1. 分离效果好,塔板数高。
2. 点样斑点小,泰州硅胶板,便于系列分析。
3. 分离时间短。
4. 灵敏度高,斑点清晰,不扩散。
技术指标:
涂板厚度 0.2—0.25mm。
活 度 (对靛蓝、苏丹红、二甲基黄的分离)三色分开。